MALBAC®技术

1、什么是MALBAC®技术?有何优势?

解答:MALBAC®(Multiple Annealing and Looping-Based Amplification Cycles),即多次退火环状循环扩增技术,它是一种准线性扩增技术,是"目前最先进的全基因组扩增技术"。2012年12月这一技术在世界顶级学术杂志《Science》上发表后,在业内引起巨大轰动。

MALBAC®技术优势:

1)   降低PCR扩增偏倚,使得单细胞中最大90%以上的基因组能够被测序。

2)   这种方法使得检测单细胞中较小的DNA序列变异变得更容易,因此能够发现个别细胞之间的遗传差异。这样的差异可以帮助解释癌症恶化的机制,生殖细胞形成机制,甚至是个别神经元的差异机制。

3)   灵敏度高:单细胞、单染色体或0.5pg的基因组DNA即可进行扩增。

4)   扩增均匀性显著优于其它同类技术,低覆盖度测序数据即可进行CNV分析,用于染色体三体检测及染色体微缺失变异检测。

5)   扩增产物用途广泛:可用于二代测序、微阵列、qPCR、基因克隆等下游应用。


2、 MALBAC®临床应用有哪些注意事项?

解答:由于MALBAC®灵敏度高,微量初始模板扩增时极易污染,污染物主要来源于外部环境。污染物与模板竞争扩增,经扩增放大后会影响检测结果的准确性。所以在MALBAC®过程中要严格各项操作步骤,防止污染引发不良后果。


3、 开展MALBAC®技术的实验室需具备什么条件?

解答:由于MALBAC®技术灵敏度高,对实验室要求较高,需要独立洁净的房间,并具有通风系统、超净工作台、紫外灭菌系统。


4、 什么是等位基因脱扣?MALBAC®技术如何有效防止ADO?

解答:等位基因脱扣(alle drop out, ADO)即一个细胞内来自双亲的两个等位基因只有一个扩增到,另外一个在PCR过程中丢失。ADO是单细胞全基因组扩增过程中常见的问题,是引起误诊的关键。MALBAC®技术是一种准线性扩增技术,它的技术原理如下图:

MALBAC®单细胞全基因组扩增过程分三步:细胞裂解、预扩增和指数扩增。MALBAC®技术有效防止ADO的关键在预扩增;MALBAC®所用引物5’端为27个核苷酸的共同序列,3’端为变化多样的8个核苷酸。3’端随机结合到DNA模版上,在一次延伸后,完整的扩增产物含有5’端固定序列,而半扩增产物则没有,半扩增产物被用作模版进行第二轮扩增,直到获得5’端固定序列。完整的扩增产物会发生环化,不再被复制,防止了过度拷贝;再进行常规的PCR扩增,引物同样使用上述27个核苷酸组成的共同序列,只有完整的DNA才会被扩增。避免了在此过程中出现的等位基因脱扣现象继续传递下去,从而有效防止ADO。


5、MALBAC®可以扩增的样品有哪些?

解答:(1)各种类型单细胞;(2)基因组DNA;(3)新鲜或干燥的血液;(4)新鲜或冷冻的组织;(5)微量古生物样本(考古);(6)司法痕量物证等。


6、经本试剂盒扩增后的 DNA 产物可用于多种下游分析

解答:1)基因突变检测; (2SNP 基因分型; (3CNV 全景图和非整倍体检测; (4)全基因组和外显子测序; (5)实时定量 PCR; (6)分子克隆; (7)微阵列比较基因组杂交。


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